bTC试剂盒

资讯 2024-06-23 阅读:52 评论:0

BTC试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中β细胞素(βTC)含量或活性。名称：人β细胞素(βTC)ELISA试剂盒种属：人英文名：H...

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β细胞素

BTC

试剂盒阴性对照出现阳性结果，可能原因和解决方法：

问题一：阴性对照出现阳性结果
可能原因	解决方案
试剂/样本污染	试剂和样品可能污染，或者由于孔之间的溅洒出现交叉污染应当更换新鲜试剂，小心操作移液器。
夹心ELISA-检测抗体与包被抗体/抗原反应	确定使用的是正确的包被抗体和检测抗体，他们之间不会互相反应。
酶标板洗板不彻底	用洗液充满板孔确保每孔被充分洗涤，洗板前确保所有的剩余抗体溶液被倒净。
抗体量过多导致非特异结合	根据推荐用量使用抗体，尽量使用较少的抗体

BTC

试剂盒酶标板整体背景高，可能原因和解决方法：

问题二：酶标板整体背景高
可能原因	解决方案
结合反应太强或时间过长	检查底物的稀释，使用建议的稀释度，当酶标板显色足够进行吸光度读数时立即使用终止液终止反应
底物溶液或终止液不是新鲜配制的	使用新鲜配制的底物溶液，终止液应该是清亮透明的，如果变黄或其他颜色则是被污染的标志，需要重新配制
没有终止反应	如果底物反应没有被终止，颜色会继续变化
酶标板在酶标仪度板前放置时间过长	颜色会继续变化，尽管加了终止液，依然会以很慢的速度变化
实验器皿污染	确保试剂是新鲜配制的并且使用的是清洁的玻璃器皿
底物孵育过程没有避光	底物孵育应该在避光环境下进行
孵育温度过高	抗体在适宜的温度下有最佳的结合活性，确保孵育在正确的温度下进行，孵育箱要设定好温度并正常工作，孵育温度可能需要一些优化
抗体非特异性结合	应确保进行了封闭并且使用的是恰当的封闭液，最好使用5%~10%的与二抗同种动物来源的血清或牛血清，确保板孔经过预处理以防止非特异结合，使用亲和力强、纯度高的抗体，最好经过了预吸收处理

BTC

试剂盒吸光度数值低，可能原因和解决方法

问题三：吸光度数值低
可能原因	解决方案
使用的样品中没有显示靶蛋白或者靶蛋白显示的水平低	检查靶蛋白表达系统，确保它在您的样品中被表达出来，如果靶蛋白的表达水平低，需要增加样品使用量，或者您可能需要选择一个更加灵敏的检测方法，确保您使用的是没有超过测定方法检测范围的阳性对照
抗体不足	确定使用的是建议的抗体量，为了使结果更好可能需要增加抗体的浓度
底物溶液不是新鲜配制或成分有误	使用新鲜配制底物溶液，确保储备液在有效期内并且正确保存，使用的浓度也是正确的，确保试剂的按正确的浓度使用
试剂不是新鲜配制或PH值有误	确保试剂配制正确并在有效期内
孵育时间不够长	如果建议了孵育时间，确保按推荐的时间长度孵育抗体，为了使结果更理想，孵育时间可能需要增加
孵育温度太低	抗体在适宜的温度下有最佳的结合活性，确保孵育时在正确的温度下进行，孵育箱要设定好适宜的温度并正常工作，孵育温度可能需要一些优化，确保所有的试剂在使用前是室温
未加终止液	加入终止液可以增加显色反应的强度，也能固定反应最终的颜色

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试剂盒吸光值高，可能原因和解决方法

问题四：吸光值高
可能原因	解决方案
样品和/或阳性对照吸光度数高。吸光度没有按样品在板上的稀释梯度递减	样品或阳性对照的浓度过高，超出了实验方法检测的范围。重新设置实验方法或者在加样前稀释降低样品和对照的浓度，在处理结果计算浓度时考虑到所作的稀释

问题五：酶标板上吸光度不规律
可能原因	解决方案
孵育时酶标板叠在一起	酶标板叠在一起使板子每个孔的温度不能平衡一致，请避免堆积
吸液不一致	确保移液器使用正确并进过校准、确保枪头差的足够紧密。板子稀释时要特别仔细，注意确保每个枪头都吸上和排除正确量的液体，这对平行样品结果的一致性有很大影响
抗体稀释液/试剂	为保证板子所有孔的浓度一致，确保所有的试剂和样品在加到板子上以前都被均匀混合
孔板变干涸	确保所有孵育期间酶标板始终被盖好。放置一个潮湿的水盘（确保清洁，无菌水）在孵育箱底部
洗板不充分	这将导致一些孔没有其他孔清洁的好，残留不同量的未结合的抗体，使后面的结果产生不一致
酶标板底部不净影响吸光度读取	读板前小心清洁酶标板底部